Antecedentes y objetivo

En la actualidad existe una gran demanda de vectores lentivirales debido al incremento de los productos destinados a la terapia celular y génica en la clínica. Debido al gran número de recipientes necesarios para la producción de vectores lentivirales con células adherentes, los fabricantes han recurrido a los biorreactores y a las células adaptadas en suspensión para reducir las necesidades de espacio, mano de obra y costes. Los biorreactores tradicionales de tanque agitado utilizan agitación mecánica para proporcionar la mezcla y aireación del volumen de cultivo. Este método de agitación puede generar grandes fuerzas de cizallamiento que pueden afectar a su vez a la viabilidad de las células, reduciendo así el rendimiento de los vectores lentivirales.

Sin embargo, existe una alternativa a los biorreactores convencionales que es el sistema de biorreactorairlift de un solo uso y que reduce estas fuerzas de cizallamiento. En lugar de la agitación mecánica, este biorreactor utiliza la insuflación de gas para mezclar suavemente el volumen de cultivo al tiempo que mantiene la homogeneidad del recipiente y una aireación suficiente. En este experimento, se expandió una línea celular HEK293 adaptada en el biorreactor airlift de un solo uso y, a continuación, se transfectó transitoriamente para producir un vector lentiviral. Posteriormente, se comprobó el título funcional del vector.

Métodos, resultados y conclusión

La suspensión adaptada IU293T(S), obtenida de la línea celular HEK293T, fue desarrollada por la Facultad de Medicina de la IU, donde las células se expandieron en matraces agitados y finalmente en un biorreactor airlift de un solo uso. Los cultivos también se suplementaron con Antifoam C y Pluronic™ F-68 para reducir la formación de espuma. Se recogieron muestras periódicamente para generar una curva de crecimiento. Una vez generado un número suficiente de células para un lote de 6L, se transfectaron transitoriamente utilizando un sistema de plásmidos de tercera generación.

Este sistema incluía un plásmido que contenía gag y pol, un plásmido de envoltura VSVG, un plásmido que contenía Rev y un plásmido de vector lentiviral que expresaba GFP dirigido por un promotor CMV. Se utilizó el reactivo de transfección PEIpro® y butirato sódico para mejorar la transfección. 64 horas después de la transfección, se recogió el sobrenadante, se clarificó, se tomaron alícuotas y se almacenaron a -80°C. A continuación, se descongelaron las alícuotas y se utilizaron para obtener los valores de p24. Posteriormente, se transdujeron células HEK293 adherentes con el vector y se midieron los niveles de expresión de GFP mediante citometría de flujo para determinar el título funcional. Estos resultados demostraron la viabilidad del uso del biorreactor airlift de bolsa de un solo uso de Cellexus CellMaker.